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技術(shù)文章首頁 > 技術(shù)文章 博萊霉素在實驗時一定要注意這些要點
  • 博萊霉素在實驗時一定要注意這些要點
  • 點擊次數(shù):2482 更新時間:2019-10-26
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  •    博萊霉素與鐵的復(fù)合物嵌入DNA,引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第1步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對之間,同時末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用,使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復(fù)合物導(dǎo)致超氧或羥自由基的生成,引起DNA鏈斷裂??诜o效,需經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射。
     
      博萊霉素的特點是:
      1、非凍保存提取RNA用的新鮮組織,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可長期保存。其間樣品可反復(fù)凍融十多次。
      2、應(yīng)用范圍廣,可用于保存,郵寄和運輸病毒、細(xì)菌、果蠅、植物組織、動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、懸浮細(xì)胞(白細(xì)胞、流式細(xì)胞儀收集的細(xì)胞)等。
      3、兼容性廣,RNALOCKER保存的樣品可以直接用于RNA提取也可直接用于組織切片、免疫學(xué)和流式細(xì)胞分析。
      4、結(jié)果準(zhǔn)確,本產(chǎn)品進入細(xì)胞后能迅速鎖定RNA水平,使實驗結(jié)果更能準(zhǔn)確反映取樣時基因表達譜的真實狀態(tài)。
     
      博萊霉素的實驗要點:
      1、CTAB溶液在低于15℃時會析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。
      2、在適條件下,DNA—CTAB沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的DNA沉淀中可能含有雜質(zhì),特別是多糖,使DNA沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA.—CTAB沉淀。
      3、飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性,但酚不能*抑制RNA酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和L仿的混合液,可減輕這兩種現(xiàn)象,同時可加入適量的異戊醇(苯酚—L仿—異戊醇=25:24:1),異戊醇的作用是消泡,并使蛋白質(zhì)層緊密,使水相和有機相分層較好。細(xì)菌的培養(yǎng)和收集將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5mlLB液體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。非凍型組織RNA保存液小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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